2.1.5 PREPARACION Y MANEJO DE SOLUCIONES STOCK

Son soluciones concentradas de nutrientes, son sales minerales que se emplean para un medio en particular algunos de estos se emplean en bajas concentraciones de acuerdo al mejor manejo en laboratorio y hace mas rápida la futura preparación de medios y posteriormente la siembra de tejidos vegetales.

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES MADRES ( STOCK)

INTRODUCCIÓN

La célula vegetal para su metabolismo requiere elementos esenciales, los cuales le permiten completar su ciclo normal de vida; algunos los requieren en cantidades mayores, por lo que se llama macroelementos, ellos son: C, H, O, N, P, K, Ca, Mg y S; y los que requiere en menores cantidades, llamados microelementos; como son; Fe, Mn, Cu B, Mo, Zn, y Cl. En el cultivo de tejidos vegetales estos elementos se agrupan en compuestos orgánicos e inorgánicos con un grado de reactivo especifico, los cuales deben ser disueltos en agua. En ocasiones se requieren concentraciones muy bajas de alguno de ellos, por lo que es necesario preparar soluciones a una elevada concentración y a partir de esta diluirla hasta la concentración requerida. Para facilitar la preparación es necesario tener estándares de concentración conocida, soluciones madres. Existen varias formas de expresar la cantidad de los compuestos en una solución. Los principales son: porcentaje (%), molaridad (M) y partes por millón (PPM). Para que los tejidos establecidos in vitro respondan a la diferenciación (callo, organogénesis) se requiere que el medió de cultivo los contenga. Algunos de las presentaciones que contienen estos elementos son incompatibles químicamente (reaccionan entre si) y no se solubilizan, por lo que es necesario agruparlos por afinidad química. En esta practica realizaremos la preparación de las soluciones madre, patrón o estándar.

OBJETIVOS

· Conocer los diferentes componentes del medio de cultivo y su naturaleza Química y Bioquímica.
· Manejar las técnicas básicas a través del uso adecuado de reactivos.
· Comprender la importancia nutricional de los componentes de los medios de cultivo.

MATERIALES
• Probeta graduada
• Matraz erlenmeyer
• Vaso de precipitado
• Micropipeta
• Pipeta
• Agua destilada
• Reactivos ya pesados

CALCULO DE LAS CONCENTRACIONES DE SULFATOS PARA PREPARAR EN 200 ML.

Reactivos
ü Mg SO4 . 7 H2O……370mg/l
ü Mn SO4 . 4 H2O……22.3mg/l
ü Zn SO4 . 7 H2O…….8.6mg/l
ü Cu SO4 . 5 H2O.……0.025mg/l

Operación para calcular el Mg SO4 . 7 H2O
1. - Mg SO4 . 7 H2O: (370 mg/L) (100x): 37,000mg/l
Esto es a 1 concentración de 1L, pero se busca aforar a 200 ml. Entonces:
(37,000 mg/L) (200 ml) / 1000 ml: 7400mg/200ml
Ahora se debe convertir a (g):
(7400 mg/ 200 ml) (1 g) / 1000 mg: 7.4g/200ml

Operación para calcular Mn SO4 . 4 H20
1. - Mn SO4 . 4 H2O: (22.3 mg/L) (100x): 2230mg/l
Esto es a 1 concentración de 1L, pero se busca aforar a 200 ml. Entonces:
(2230 mg/L) (200 ml) / 1000 ml: 446mg/200ml
Ahora se debe convertir a (g):
(446 mg/ 200 ml) (1 g) / 1000 mg: 0.446g/200ml

PESAJE DE LOS MATERIALES CALCULADOS.
Ya después de haber calculado se procedió a pesar las cantidades en la balanza analítica, se equilibro la balanza para el pesaje, se utilizo papel aluminio para verter los ingredientes cuando se esté pesando.

DISOLUCIÓN DE LOS INGREDIENTES PESADOS.

Los ingredientes se disolvieron por separado en un vaso de precipitado, el Cu SO4 . 5 H2O, debido a que no se calculo exactamente la cantidad deseada que era de 0.0005g, ya que se obtuvo 0.0064g, para obtener la concentración correcta el Cu SO4 . 5 H2O se disolvió en 10 ml de agua destilada, ya que se disolvió completamente, se hizo una regla de 3.
(0.0005g Cu SO4 . 5 H2O) (100ml) / (0.0064g Cu SO4 . 5 H2O): 0.781 mililitros